Методы санитарно-микробиологических исследований. Бактерии группы кишечной палочки (бгкп) и сальмонеллы: характеристика, санитарно-показательное значение, методы определения, нормирование в пищевых продуктах

Из остатков жизнедеятельности человека. Этот микроорганизм является постоянным обитателем толстого отдела кишечника человека и животных. Кроме Е. coli, в группу кишечных бактерий входят эпифитные и фитопатогенные виды, а также виды, этиология (происхождение) которых пока не установлена. К бактериям группы кишечных палочек относят роды Escherichia (типичный представитель Е. coli), Citrobacter (типичный представитель Citr. coli citrovorum), Enterobacter (типичный представитель Ent. aerogenes), которые объединены в одно семейство Enterobacteriaceae благодаря общности морфологических и культуральных свойств. Они характеризуются различными ферментативными свойствами и антигенной структурой.

Морфология

Бактерии группы кишечных палочек - это короткие (длина 1-3 мкм , ширина 0,5-0,8 мкм) полиморфные подвижные и неподвижные грамотрицательные палочки, не образующие спор .

Культуральные свойства.

Колонии E. coli на плотной питательной среде

Бактерии хорошо растут на простых питательных средах: мясопептонном бульоне (МПБ), мясопептонном агаре (МПА). На МПБ дают обильный рост при значительном помутнении среды; осадок небольшой, сероватого цвета, легкоразбивающийся.Образуют пристеночное кольцо, пленка на поверхности бульона обычно отсутствует. На МПА колонии прозрачные с серовато-голубым отливом, легко сливающиеся между собой. На среде Эндо образуют плоские красные колонии средней величины. Красные колонии могут быть с темным металлическим блеском (Е. coli) или без блеска (E.aerogenes). Для лактозоотрицательных вариантов кишечной палочки (B.paracoli) характерны бесцветные колонии. Им свойственна широкая приспособительная изменчивость, в результате которой возникают разнообразные варианты, что усложняет их классификацию.

Биохимические свойства

Большинство бактерий группы кишечных палочек (БГКП) не разжижают желатина , свертывают молоко, расщепляют пептоны с образованием аминов , аммиака , сероводорода , обладают высокой ферментативной активностью в отношении лактозы, глюкозы и других сахаров , а также спиртов . Не обладают оксидазной активностью. По способности расщеплять лактозу при температуре 37°С БГКП делят на лактозоотрицателъные и лактозоположительные кишечные палочки (ЛКП), или колиформные, которые формируются по международным стандартам. Из группы ЛКП выделяются фекальные кишечные палочки (ФКП), способные ферментировать лактозу при температуре 44,5°С. К ним относится Е. coli, не растущая на цитратной среде.

Устойчивость

Источники

Р.П. Корнелаева, ПП. Степаненко, Е.В. Павлова Санитарная микробиология сырья и продуктов животного происхождения. 2006, с.15-18

Wikimedia Foundation . 2010 .

Смотреть что такое "Бактерии группы кишечных палочек" в других словарях:

бактерии группы кишечных палочек - 3.2 бактерии группы кишечных палочек; БГКП, коли формы: Микроорганизмы семейства энтеро бактерий родов эшерихия, цитробактер, энтеробактер, клебсиелла, серратия; бесспоровые, грамотрицательные, аэробные и факультативно анаэробные палочки,… …

Под именем бактерий в науке известны мельчайшие, микроскопической величины организмы, принадлежащие к растительному царству. По своей организации, по своим морфологическим особенностям, Б. ближе всего стоят к так называемым циановым или… … Энциклопедический словарь Ф.А. Брокгауза и И.А. Ефрона

См. также: Кишечная палочка Бактерии группы кишечной палочки (БГКП, также называются колиморфными и колиформными бактериями) условно выделяемая по морфологическим и культуральным признакам группа бактерий семейства энтеробактерий, используемая… … Википедия

Кишечная палочка Фотография Escherichia coli через СЭМ Научная классификация Царство: Бактерии … Википедия

ТИМАЦ Комплекс тестов для дифференцирования отдельных родов бактерий группы кишечных палочек Т температурный тест (тест Эйкмана); И тест индолообразования; М реакция с метиловым красным; А реакция на ацетилметилкарбинол (реакция … Википедия

ГОСТ Р 53430-2009: Молоко и продукты переработки молока. Методы микробиологического анализа - Терминология ГОСТ Р 53430 2009: Молоко и продукты переработки молока. Методы микробиологического анализа оригинал документа: 3.2 бактерии группы кишечных палочек; БГКП, коли формы: Микроорганизмы семейства энтеро бактерий родов эшерихия,… … Словарь-справочник терминов нормативно-технической документации

Вологодское масло несолёное сладкосливочное масло с массовой долей влаги не более 16,0 %, производимое на территории Вологодской области, известное благо … Википедия

БГКП - большая группа кишечной палочки БГКП бактерии группы кишечных палочек

Для того, чтобы пить чистую воду, ее нужно, прежде всего, оценить на пример содержания разного рода включений. Даже вода из крана, может бать заражена . И причина тому, плохое состояние системы водоснабжения. Очень часто в воде, особенно неочищенной сегодня можно встретить всякого рода бактерии. А для того, чтобы вода стала питьевой, колиморфные бактерии в воде следует уничтожать.

Так ли уж нужно проверять воду?

Выявить бактерии в воде не так просто. Все таки есть четко урегулированный на законодательном и нормативном уровне состав воды и присутствие в ней каких-то не совсем полезных бактерий можно не увидеть или не почувствовать на вкус. Потому всем, кто строит дом, или просто хочет купить себе , советуют проводить анализ воды с целью определить ее состав. И наличие колиформных бактерий в воде будет обязательным элементом бактериологического анализа. Ниже представлена сводная таблица нормативов для питьевой воды центрального водоснабжения. Это те нормы, на которые следует ориентироваться при оценке.

Как наглядно видно из таблицы, бактерий, практически не должно быть в воде. Любое присутствие колиформных бактерий в воде или каких других, может вызвать массовые эпидемии. Потому и поставлен запрет на их присутствие. Это может привести к летальному исходу многих людей.

Весь перечень вредных бактерий довольно обширен. Выявить все вредные бактерии в воде сложно, потому и придумали более - химико-бактериологический, который и помогает выявить вредные палочные бактерии, в том числе. Эти вредоносные примеси можно выявить только в лаборатории. На вкус, цвет и вид выявить их невозможно.

Появляются такие бактерии в любом теплокровном существе. В том числе в кишечнике животных или человека. Откуда же они берутся в воде? Все просто, если в воду попадают фекалии, то развитие таких вредоносных бактерий очень возможно.

Фекалии же могут проникать в воду из сточных канав, выгребных ям, фильтровых траншей. Проявиться они могут даже в , из-за смещения слоев грунта. Человек же эксплуатирующий колодец, может этого и не заметить. Потому и рекомендуют через время делать анализ воды в колодце, если нет качественной очистной системы на участке.

По санитарным нормам колиформных бактерий в воде не должно быть совсем. Потому на станциях водоснабжения всегда есть этап обеззараживания, который как раз и занимается устранением вредных бактериологических примесей.

Наиболее популярными вариантами устранения бактерий из воды являются обеззараживающие установки. Можно конечно и вручную дозировать дезинфицирующие вещества. Но это чревато плохими последствиями. Из-за этого на производствах давно убрали ручной труд в работе обеззараживающих установок.

Для устранения бактериологической угрозы на предприятиях используют дозирование химических веществ. Если вода будет использоваться для питья, то в этом случае применяют ультрафиолетовые дезинфекторы, которые работают без вредных веществ.

О бактериях научным языком и более подробно

Колиформные бактерии называются еще очень вредными. Это группа одна из самых вредных групп бактерий. Из семейства энтеробактерий, группу палочки культуральным признакам. Группа таких бактерий является санитарным показателем фекальных вод.

По порядку ниже будут исследованы следующие особенности поведения бактерий кишечной палочки:

• Поведение бактерий в плотной питательной среде;
• Биохимические особенности
• Устойчивость
• Санитарные значения

Хотя данный вид информации довольно специфичен, но он помогает наглядно проследить все особенности работы бактерий в воде. На сколько они устойчивы, что вызывают своей работой в воде и т.д.

Итак, питательная среда. Бактерии прекрасно себя чувствуют в мясном бульоне или агаре. Осадок при этом имеет небольшие размеры, а вот рост бактерий резко идет вверх и появляется сильное помутнение воды.

Бактерии в бульене образуют окаемку, пленки при этом на поверхности нет. По цвету, большое скопление бактерий может иметь серо-голубой оттенок, иногда колонии могут быть красными с металлическим отливом. Колонии бактерий с отрицательной лактозой чаще всего бесцветны. В общем, же классифицировать по цветам и поведению бактерии группы палочки довольно сложно.

Теперь, что касается биохимических свойств. Бактерии такого рода помогают свертываться молоку, не разводят желатин. Оксидазной активности у них нет.

Расщеплять лактозу могут как раз бактерии кишечной палочки (с положительной лактозой).

Что касается устойчивости бактерий к разного рода химическим сильным дезинфекторам. Обезвредить кишечную палочку довольно просто. Для этого достаточно стандартной пастеризации при температуре 65, от силы 75 градусов. При температуре в 60 градусов по Цельсию, кишечная палочка убивается в течение 15 минут. Однопроцентный раствор фенола убирает палочку за период от 5 до 15 минут. Если разводить сулему в пропорциях один к тысячи, то тогда палочка будет убрана за 2 минуты. То есть убрать такие бактерии – не проблема.

Санитарные показатели бактерий кишечной палочки имеют разные значения. Если бактерии такого рода обнаруживаются на фруктах овощах в воде или почве, это означает только одно - свежее фекальное загрязнение имеет место.

Что характерно, в желудке человека, если он долгое время применяет антибиотики, тоже образуются бактерии кишечной палочки. Лактозоотрицательные бактерии в состоянии сбродить лактозы, именно они и образуются в большом количестве в кишечнике. Так образуются брюшной тиф, дизентерия, как раз те болезни, которые проявляют себя при употреблении зараженной кишечной палочкой воды.

Из всего вышесказанного, можно сделать вывод. Колиформные бактерии в воде должны полностью отсутствовать. Наличие их в воде угрожает эпидемиями и массовыми смертями. Чтобы избежать массового заражения, нужно постоянно следить за составом воды. Изменение потоков подземных вод, может привести к образованию грязных потоков.

Устранить колиформные бактерии из воды можно всего двумя способами. Использовать либо дезинфекцию, либо обеззараживание. Разница в понятиях состоит в воздействии. Оно может быть химическим, а может быть физическим. Для может использоваться химическое воздействие с помощью хлорсодержащих элементов. Но в этом случае обязательно должна проходить доочистка. Чтобы устранить из воды излишек хлора, который так же негативно влияет на здоровье человека.

Остальные варианты производства питьевой воды используют ультрафиолетовые излучатели, которые убивают группу бактерий кишечной палочки с помощью . Не облучая при этом воду вредными лучами и не оставляя после себя следов.

Еще один вариант дезинфекции использование озона – концентрированного жидкого кислорода. Он быстро испаряется с поверхности воды, отлично чистит ее и не имеет остаточных явлений в воде. Полностью экологически безопасен. Но труден в производстве и дорог.

БГКП. К бактериям группы кишечных палочек (колиформных) относят роды Escherichia (типичный представитель E. coli ), Citrobacter (типичный представитель C. colicitrovorum ), Enterobacter (типичный представитель E. aerogenes), которые объединены в одно семейство Enterobacteriaceae благодаря общности свойств.

Общая хар-ка БГКП : - палочки грамм-отрицательные, короткие; - не спорообразующие; - на среде Энда дают красные колонии с металлическим блеском - E.coli , красные – энтеробактерии, розовые – цитробактерии, б/цв – лактозо – отрицательные.Биохимические свойства. Большинство бактерий группы кишечных палочек (БГКП) не разжижают желатина, свертывают молоко, расщепляют пептоны с образованием аминов, аммиака, сероводорода, обладают высокой ферментативной активностью в отношении лактозы, глюкозы и других сахаров, а также спиртов. Не обладают оксидазной активностью. Устойчивость. Бактерии группы кишечных палочек обезвреживаются обычными методами пастеризации (65-75°С). При 60°С кишечная палочка погибает через 15 минут. 1% раствор фенола вызывает гибель микроба через 5-15 минут.Санитарно-показательное значение. Бактерии рода Escherichia – постоян. обитатели кишечника чел и животн, и обнаружение их в воде и ПП свидетельств о свежем фекальном загрязнении. Бактерии родов Citrobacter и Enterobacte r могут находиться повсюду: в почве, на растениях, реже в кишечнике. Считают, что они предст собой результат изменен ишерихий после пребывания их во внешней среде и поэтому являются показателями более давнего фекального загрязнения. Значение БГКП:

В сыром молоке указывает - на на эпидемиологическую опасность

Через несколько часов при 8-10 о С - о нарушении условий хранения и реализации, транспортиров.

Появл. БГКП после пастеризации расценивают как 2-ое загрязнение

Наличие БГКП в готовой продукции указывает на - плохую мойку и дезинфекцию оборудования.

Род Salmonella . Сальмонеллезы относятся к числу наиболее распространенных токсикоинфекций. Обнаруж сальмонелл всегда свидетельствует о фекальном загрязнении. Сальмонеллы устойчивы к высоким концентрациям поваренной соли (особенно в средах, содержащих белок) и высушиванию. Сохраняют свою жизнеспособность в комнатной пыли, в различных почвах (97 мес.), в воде открытых водоемов (до 45 дн). Находясь в ПП, особенно в мясных, сальмонеллы очень устойчивы к тепловой обработке. Соление и копчение мяса оказывают слабое воздействие на сальмонелл. При размножении сальмонелл в молоке его внешний вид и вкус не изменяются, пастеризация молока в течение 30 мин при 85ºС в производственных условиях способствует полному уничтожению этих бактерий. Человек заражается сальмонеллами в результ употребл мяса и мясопродуктов. Молоко и молочные продукты гораздо реже явл причиной пищевых отравлений. Инфицирование молока главным образом происходит через загрязненную посуду, доильные аппараты, руки доильщиц и др. Возбудители сальмонеллезов могут попасть в ПП, изготовленные из растительного сырья (салаты и соусы столовые) не только в процессе производства, но и с пищевыми ингредиентами, в частности с сухими овощными приправами и специями.

Идентификация БГКП:

● Посев на среду обогащения - Кесслер, одновременная идентификация по газообразов.: есть газообразование - возможно БКГП, нет газообразования - нет БГКП

● Идентификация БГКП на среде Эндо: Из газ(+) пробирок отбирают по 1 мл и сеют на тв.среду Эндо, идентифицируют колонии БГКП по цвету, проводят дифференциацию по родам в зависимости от цвета колоний: Если есть красные, розовые и бледно-розовые культуры - значит присутствуют БГКП, если нет колоний – нет БГКП. Если есть колонии, но бесцветные - подозрение на патогены. Далее по цвету идентифицируют роды БГКП: 1) красные - с металлич. оттенк. – эшерихия 2) розовые – энтеробактер 3) бледно-розовые - со слизью – клебсиела 4) бледно-розовые - цитробактер, церрации 5) бесцветные (лактозо (-)) - протей 6) прозрачные мелкие – патогенны

● Идентификация на среде Козера: выращивание на среде с глюкозой/лимонной кислотой, Т=43°С,24ч. М/о цитрат(+) меняют цвет красителя с зеленого на васильковый. М/о цитрат(-) не меняют цвет.

Определяют по количеству положительных проб в 3 пробирках.

Сальмонеллы – патогенны, анализируют в 25 г продукта, их там не должно быть. Служат индикатором патогенов.

Выявление сальмонелл проводится в 4 этапа

1) первичный (прямой) посев - Посев на среду Энда и Плоскирава на сутки и Т=37 0 С. На ср. Энда – прозрачные колонии,

2) обогащение (посев на жидкие селективные среды, термостатирование)

3) посев со среды обогащения осущ после обогащения на плотные диагностические среды, термостатирование - на ср. Плоскирава- прозрачные,но более мелкие чем на среде Эндо

4) подтверждение путем установления ферментативных и серологических свойств сальмонелл

©2015-2019 сайт
Все права принадлежать их авторам. Данный сайт не претендует на авторства, а предоставляет бесплатное использование.
Дата создания страницы: 2017-04-20

Основными санитарно-показательными микроорганизмами являются бактерии группы кишечных палочек (БГКП), объединяющие 3 рода микроорганизмов - Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, входящих в семейство Enterobacteriaceae. Они обладают многими общими морфологическими, культуральными и ферментативными свойствами.

В соответствии с ГОСТ 2874-82 и ГОСТ 18963-73 к БГКП относят мелкие подвижные грамотрицательные, не образующие спор палочки, не обладающие оксидазной активностью, ферментирующие лактозу и глюкозу с образованием кислоты и газа при температуре 37 °С (в течение 5-24 ч) (рисунок 45).

Кишечные палочки (бактерии группы кишечных палочек) - это факультативные анаэробы, хорошо растущие в универсальных питательных средах, устойчивые к действию многих анилиновых красителей. Им свойственна широкая приспособительная изменчивость, в результате которой возникают разнообразные варианты, что усложняет их классификацию.

Из всех бактерий группы кишечных палочек наибольшее санитарно-показательное значение имеют микроорганизмы рода Escherichia.

По способности расщеплять лактозу при температуре 37°С БГКП делят на лактозоотрицательные и лактозоположительные кишечные палочки (ЛКП), или колиформные, которые нормируются по международным стандартам. Из групп ЛКП выделяют фекальные кишечные палочки (ФКП), которые способны ферментировать лактозу при температуре 44,5 °С. К ним относится Е. coli, не растущая на цитратной среде.

Для дифференциации бактерий группы кишечных палочек используют среду Эндо, на которой Е. coli дает характерный рост в виде колоний красного цвета с металлическим блеском.

Среда Эндо является селективной средой для энтеробактерий, выпускается в сухом виде. В ее состав входят МПА, лактоза, фуксин основной, сульфат и фосфат натрия.

Приготовление среды: в 100 см 3 дистиллированной воды растворяют 5 г. сухой среды, кипятят при постоянном помешивании

Рис. 45. Escherichia coli: a - колонии; б – клетки

2-3 мин и разливают по чашкам Петри. Для предотвращения образования большого количества конденсата среду после кипячения охлаждают до 50 °С. Готовая среда имеет розовый цвет. Колонии лактозоположительных штаммов красные (образовавшаяся молочная кислота реагирует с сульфатом натрия, в результате чего фуксин восстанавливает свой цвет), лактозоотрицательные - бесцветные или слегка розовые.

При росте БГКП на жидких питательных средах (МПБ) наблюдаются значительные помутнение среды и образование сероватого, легко разбивающегося осадка. Пленка на поверхности бульона обычно не образуется.

На МПА БГКП образуют средних размеров округлые гладкие блестящие полупрозрачные колонии.

Кишечные палочки не разжижают желатин, способны ферментировать целый ряд углеводов - лактозу, глюкозу, мальтозу, сахарозу с образованием кислоты и газа. Ферментативные свойства (сбраживание углеводов) непостоянны, поэтому при дифференциации БГКП их учитывают не самостоятельно, а в комплексе с другими тестами.

В молоке бактерии группы кишечных палочек хорошо размножаются, доводя его кислотность до 60-80 °Т и образуя в нем неровный ноздреватый сгусток. В присутствии молочнокислых бактерий под влиянием выделяемых ими антибиотических веществ и кислоты рост кишечных палочек тормозится. При режимах пастеризации, принятых в молочной промышленности, кишечные палочки погибают. Обычные дезинфицирующие средства в общепринятых разведениях обеззараживают оборудование от этих бактерий.

Санитарно-показательное значение отдельных родов бактерий группы кишечных палочек неодинаково. Обнаружение бактерий рода Escherichia в пищевых продуктах, в воде, почве, на оборудовании свидетельствует о свежем фекальном загрязнении этих объектов, что имеет большое санитарное и эпидемиологическое значение.

Иногда считают, что бактерии родов Citrobacter и Enterobacter представляют собой измененные эшерихий после пребывания их во внешней среде. Следовательно, Citrobacter и Enterobacter являются показателями более давнего (несколько недель) фекального загрязнения и поэтому они имеют меньшее санитарно-показательное значение по сравнению с бактериями рода Escherichia.

Дифференциацию бактерий группы кишечных палочек проводят с учетом различий физиологических свойств микроорганизмов. На этой основе разработаны специальные тесты, используемые для распознавания фекальных и нефекальных кишечных палочек, основным из которых является комплекс признаков ТИМАЦ (ТЛИМАЦ):

Т -температурный тест;

И - тест индолообразования;

М - реакция с метиленовым красным;

А - реакция на ацетилметилкарбинол (реакция Фогес-Проскауэра);

Ц - цитратный тест;

Л - ферментация лактозы.

Температурный тест (тест Эйкмана) - способность ферментировать глюкозу и другие углеводы (лактозу, маннит) с образованием газа при температуре 44-46 °С (чаще 44,5 °С). Для эшерихий температурный тест положительный, представители родов Citrobacter и Enterobacter такой способностью не обладают. Этот тест определяют на специальных средах Эйкмана, Кесслер, Булижа.

Среда Эйкмана (глюкозопептонная среда): пептон - 10 г; хлористый натрий - 5 г, глюкоза - 5 г; вода водопроводная 1 000 см 3 . В концентрированной среде состав всех ингредиентов, кроме воды, увеличен в 10 раз. Среду разливают в пробирки или колбы с бродильными трубочками (газовками), стерилизуют текучим паром по 30 мин в течение 3 дней (допускается стерилизация в автоклаве при 112°С-15мин).

Тест индолообразования - способность расщеплять аминокислоту триптофан, входящую в состав многих белков, с выделением ряда продуктов, в том числе индола, окрашивающего среду при взаимодействии с реактивами, содержащими парадиметиламидобензальдегид в красный цвет. Индол продуцируют эшерихии, бактерии из родов Citrobacter и Enterobacter индола не образуют. Наличие индола определяют в старых бульонных культурах (лучше в бульоне Хоттингера с содержанием 200-300 мг % триптофана) при помощи реактива Эрлиха.

Реактив Эрлиха: парадиметиламидобензальдегида - 4 г; 96° этилового спирта - 380 см 3 ; концентрированной хлористо-водородной (соляной) кислоты - 80 см 3 . Перед добавлением (0,5-1 см 3) реактива Эрлиха к культуре в нее вносят 0,5-1 см 3 солянокислого эфира (для экстрагирования индола).

Исследования биохимических свойств Е. coli после развития в молоке с заквасками показали непостоянство индольного признака, 36 % штаммов Е. coli могут терять способность продуцировать индол. Поэтому применение этого признака при контроле кисломолочных продуктов может привести к неверным результатам.

Реакция с метиловым красным (реакция Кларка) заключается в определении интенсивности кислотообразования при ферментации глюкозы в питательной среде. В качестве индикатора используют метиловый красный, несколько капель которого добавляют к 3-5-суточной культуре, выращенной на среде Кларка. При рН 5 и ниже индикатор изменяет светло-желтый цвет на красный, что свидетельствует об интенсивном кислотообразовании. Представители родов Escherichia и Citrobacter дают красное окрашивание среды, a Enterobacter - желтое.

При рН выше 5 среда остается светло-желтой.

Среда Кларка: протеоза (или другой пептон) - 5 г; декстроза - 5 г; К 2 НРО4 - 5 г; дистиллированная вода до 800 см 3 . Смесь нагревают 20 мин, периодически помешивая, фильтруют, охлаждают, доводят объем до 1 000 см 3 дистиллированной водой. Разливают в пробирки по 10 см 3 , стерилизуют при 121 °С 15 мин.

Индикатор: метилового красного - 0,1 г; этилового спирта 300 см 3 . После растворения индикатора прибавляют 200 см 3 дистиллированной воды.

Реакция на ацетилметилкарбинол (Фогес-Проскауэра, 1898 г.) выявляет способность микроорганизмов образовывать в среде с глюкозой ароматическое вещество ацетилметилкарбинол (ацетоин).

Для постановки реакции к 5 см 3 4-5-суточной культуры, выращенной на пептонной среде с глюкозой или среде Кларка, добавляют такой же объем 40%-ного раствора КОН. Для ускорения реакции к 100 см 3 щелочи добавляют 0,3 г креатина [реактив СМеага (Мира)]. При наличии ацетилмети л карбинола среда окрашивается в розовый цвет.

Ацетилметилкарбинол (ацетоин) образуют бактерии рода Enterobacter. Эшерихии и представители рода Citrobacter такой способностью не обладают.

Цитратный тест - способность микроорганизмов усваивать. в качестве единственного источника углерода лимонную кислоту или ее соли. Изучаемую культуру высевают на цитратную синтетическую среду Козера или плотную среду Симмонса.

Бактерии родов Citrobacter и Enterobacter растут на цитратных средах (вызывают помутнение и изменение цвета в жидких и образование специфических колоний на плотных средах) и получили название цитратположительные или цитратассимилирующие бактерии , тогда как эшерихии не дают роста на указанных средах и называются цитратотрицательными .

Цитратная синтетическая среда Козера: MgSO 4 х 7Н 2 О - 0,2 г; NH 4 H 2 PO4 - 1,5 г; К 2 НРО 4 - 1 г; цитрата натрия х 5 Н 2 О - 2,53 г; дистиллированная вода - 1 000 см 3 Для определения изменения реакции среды прибавляют 10 см 3 0,5%-ного спиртового раствора бромтимолового синего.

Среда Симмонса: к среда Козера добавляют 2% агара, доводят рН до 7,2-7,4,стерилизуют в автоклаве при 112 °С в течение 15 мин. Индикатор добавляют после стерилизации, перед разливкой в стерильные пробирки. Среда имеет оливково-зеленый цвет.

При определении содержания цитратотрицательных эшерихии в кисломолочных продуктах можно получить завышенные результаты вследствие дополнительного учета представителей рода Enterobacter, потерявших способность утилизировать цитраты.

Цитратный тест должен сопровождаться микроскопией препаратов так как Enterococcus faecalis усваивает цитраты и может приниматься за цитратположительные кишечные палочки.

Ферментация лактозы присуща большинству видов семейства Enterobacteriaceae. Представители рода Escherichia (за исключением лактозоотрицательных вариантов) сбраживают лактозу, Citrobacter и Enterobacter ферментируют лактозу непостоянно. Способность микроорганизмов ферментировать лактозу изучают на специальных лактозосодержащих средах с различными индикаторами (среда Эндо, среды Гисса и др..

Довольно часто кишечные палочки могут иметь нетипичные признаки комплекса ТИМАЦ (ТЛИМАЦ), что затрудняет их дифференциацию. Это объясняется тем, что во внешней среде кишечные палочки подвергаются воздействию различных факторов, в результате чего происходит изменение ряда их биологических свойств. Например, после пребывания во внешней среде Е. coli утрачивает способность сбраживать лактозу, ферментировать углеводы при 43 °С и даже при 37 °С, но приобретает свойство ассимилировать (усваивать) цитраты.

При длительном применении антибиотиков, других лечебных препаратов в кишечнике человека также обнаруживают лактозоотрицательные варианты эшерихий.

В комплексе признаков ТИМАЦ основными являются температурный и цитратный тесты. Они наиболее стабильные, что позволяет дифференцировать бактерии группы кишечных палочек фекального происхождения от кишечных палочек, обитающих во внешней среде.

Наибольшее санитарно-показательное значение имеют кишечные палочки, не растущие в среде Козера с цитратами (как единственным источником углеродного питания) и ферментирующие углеводы при 43-45 °С (Е. coli). Они являются показателями свежего фекального загрязнения.

В молочной промышленности в качестве санитарно-показательных микроорганизмов выявляют бактерии группы кишечных палочек, посевы производят на среду Кесслер, культивируют при 37 °С 24 ч.

Приготовление модифицированной среды Кесслер: 16 г сухой среды Кесслер помещают в колбу и доливают питьевой водой до 1 000 см 3 . Смесь кипятят при помешивании 25 мин. Объем доводят питьевой водой до 1 000 см 3 и фильтруют через вату. Разливают в пробирки с поплавками по 5 см 3 или колбочки с поплавками по 40-50 см 3 и стерилизуют при 12 ГС в течение 10 мин. Среда имеет темно-фиолетовый цвет.

Допускается приготовление среды Кесслер из отдельных ингредиентов.

Для этого к 1 000 см 3 питьевой воды прибавляют 10 г пептона и 50 см 3 стерильной желчи (желчь бычья или других сельскохозяйственных животных), кипятят смесь при помешивании 25 мин и фильтруют ее через вату. В полученном фильтрате растворяют 2,5 г лактозы и доводят объем питьевой водой до 1 000 см 3 , устанавливают рН 7,4-7,6, после чего добавляют 2 см 3 раствора кристаллического фиолетового с массовой концентрацией 10 г/дм 3 , разливают в пробирки с поплавками или колбочки с поплавками по 40-50 см 3 и стерилизуют при 121 °С в течение 10 мин. Готовая среда должна иметь темно-фиолетовый цвет.

Критерии санитарной оценки пищевых продуктов и других объектов внешней среды по присутствию санитарно-показательных микроорганизмов предусмотрены ГОСТами и Санитарными правилами и нормами, где указывается, что бактерии группы кишечных палочек не должны обнаруживаться в определенных количествах продукта, т.е. нормируется количество санитарно-показательных микроорганизмов в единице продукта. Так, например, в пастеризованном молоке кишечные палочки не должны выявляться в 1 см 3 , в жидкой закваске для кефира бактерии группы кишечных палочек не допускаются в 3 см 3 , в сметане и твороге - в 0,001 см 3 (г) и т.д.

ЭНТЕРОКОККИ

Систематика и биологические свойства энтерококков представлены в главе 10.

Энтерококки наряду с бактериями группы кишечных палочек являются постоянными обитателями кишечника человека и теплокровных животных, в большом количестве выделяются во внешнюю среду, и обнаружение их в пищевых продуктах, воде, почве свидетельствует о фекальном загрязнении этих объектов.

Преимущества энтерококков как санитарно-показательных микробов заключается в их большей устойчивости к физическим и химическим воздействиям, в наличии избирательных сред, позволяющих обнаружить энтерококков в сильно загрязненных объектах, в несложности дифференцировки их от сходных видов и некотором отличии энтерококков человеческого и животного происхождения, что имеет существенное значение с эпидемиологической точки зрения.

Установлено, что в кишечнике человека преобладают Ent. faecalis и его варианты, в меньшем количестве обнаруживают Ent. faecium. В содержимом кишечника крупного рогатого скота, свиней, овец, лошадей преобладает Ent. faecium. Обнаружение во внешней среде Ent. faecalis и его вариантов имеет определенное санитарное и эпидемиологическое значение как показатель загрязнения объекта фекалиями человека; обнаружение Ent. faecium является показателем загрязнения фекалиями животных.

Другими преимуществами энтерококков как санитарно-показательных микроорганизмов является то, что они не размножаются вне кишечника человека и животных (за исключением пищевых продуктов); во внешней среде не подвергаются столь глубоким изменениям, как кишечные палочки, и дольше по сравнению с ними сохраняются во внешней среде.

Имеются селективные питательные среды, позволяющие выделить энтерококки в чистой культуре из объектов, сильно обсемененных посторонней микрофлорой. Для определения энтерококков чаще используют молочную среду с полимиксином по Калине (см. главу 10).

Энтерококки чрезвычайно устойчивы к низким температурам, нагреванию, хлорированию, к повышенным концентрациям сахара и соли, к высокой кислотности. Они выдерживают температуру нагревания 60-56 °С в течение 30 мин (режимы пастеризации должны обезвреживать энтерококков), способны расти в присутствии 6,5 % NaCl, 40 % желчи, в средах с рН 9,6-10.- В связи с этим для продуктов, не подвергающихся хранению, показателем санитарного состояния являются бактерии группы кишечных палочек, а для продуктов, которые длительно хранятся при низкой температуре, лучше в качестве санитарно-показательных микроорганизмов определять энтерококки. Это объясняется тем, что кишечные палочки погибают быстрее энтерококков и присутствие или отсутствие их не отражает санитарного состояния таких продуктов.

Количество энтерококков в пищевых продуктах колеблется в довольно значительных пределах - от 10 3 до 10 6 в 1 г или 1 см 3 .

Наличие большого количества энтерококков в продуктах, подвергшихся тепловой обработке, свидетельствует о слабой эффективности пастеризации (нарушение режимов), о послепастеризационном загрязнении или о хранении их в условиях, благоприятных для развития энтерококков.

В официальных документах - Международном стандарте по исследованию питьевой воды, в Стандарте по исследованию питьевой воды и сточных вод, принятом в США, в Европейском стандарте - энтерококки приняты как дополнительный показатель санитарно-гигиенического качества воды, причем в Международном стандарте подчеркивается, что при обнаружении в исследуемой воде атипичных кишечных палочек наличие или отсутствие энтерококков являются решающим для суждения о фекальном загрязнении.

В нашей стране энтерококки наряду с бактериями группы кишечных палочек используют в качестве санитарно-показательных микроорганизмов при санитарной оценке воды открытых водоемов, особенно колодцев, вода которых используется в технологическом процессе.

Энтерококки также рекомендуют использовать в качестве санитарно-показательных микроорганизмов при оценке качества хлорирования питьевой воды, при исследовании воды минеральных источников, а также пищевых продуктов с повышенной концентрацией соли (мясных продуктов).

Бактерии группы кишечной палочки (БГКП) - это условно выделяемая по морфологическим и культуральным признакам группа бактерий семейства энтеробактерий, используемая санитарной микробиологией в качестве маркера фекальной контаминации, относятся к группе так называемых санитарно-показательных микроорганизмов.

К бактериям группы кишечных палочек относят представителей родов Escherichia (в том числе и Е. coli), Citrobacter (типичный представитель C. coli citrovorum), Enterobacter (типичный представитель E. aerogenes), которые объединены в одно семейство Enterobacteriaceae благодаря общности морфологических и культуральных свойств. Они характеризуются различными ферментативными свойствами и антигенной структурой.

4. Наличие каких бактерий свидетельствует о свежем фекальном загрязнении воды?

К таким бактериям относят термотолерантные колиформные бактерии, фекальные кишечные палочки, ферментирующие лактозу до кислоты и газа при температуре 44°С в течение 24 часов и не растущие на нитратной среде.

О свежем фекальном загрязнении свидетельствует также выявление энтерококка.

Известен способ определения свежего фекального загрязнения, заключающийся в выделении из исследуемой воды энтерококков и при индексе этих микроорганизмов свыше 500 предполагается поступление свежего фекального загрязнения.

5. Какие показатели определяют при санитарно-микробиологическом исследовании воды?

1. Определение числа сапрофитных микроорганизмов.

2 . Определение числа лактозоположительных кишечных палочек.

3 . Определение числа Escherichia coli.

4. Определение числа энтерококков.

5 . Определения числа стафилококков.

6 . Определение числа БОЕ фагов кишечных палочек.

7 . Определение бактерий родов сальмонелла и шигелла.

8 . Определение наличия кишечных вирусов.

9 . Определение холерного вибриона.

6. Что такое "микробное число" и как его определяют?

Микробное число – это количественный показатель бактериальной зараженности окружающей среды, один из лабораторных санитарно-гигиенических показателей, указывающий на «общее число микробов» в 1 мл воды, 1 г твердого продукта или почвы, 1 м 3 воздуха, выросших на МПА при 37°С за 48 ч.

Для определения микробного числа делают посевы с соблюдением правил асептики в чашки Петри с МПА методом заливки с таким расчетом, чтобы на чашках вырастало от 30 до 300 колоний.

7. Какой метод используют для выявления БГКП в воде?

Для определения количества бактерий группы кишечной палочки существует два метода: бродильный и мембранных фильтров.

Сущность метода мембранных фильтров состоит в концентрировании бактерий из определенного объема исследуемой воды на мембранном фильтре и выращивании их при температуре 37 ± 0,5°С в среде Эндо. При этой температуре создаются оптимальные условия для выращивания бактерий.

8. Для каких целей используют методы Коха и Кротова?

Методы Коха и Кротова используют для санитарно-микробиологического исследования воздуха.

9. Назовите санитарно-показательные микроорганизмы, по наличию которых в воздухе можно оценить его чистоту?

Санитарно-показательными микроорганизмами для воздуха являются золотистые стафилококки и гемолитические стрептококки (Staphylococcus aureus, группа Streptococcus viridans и Streptococcus haemolyticus).

10. В чем заключается аспирационный метод и с какой целью его используют?

Аспирационный метод основан на принудительном оседании микроорганизмов на поверхность плотной питательной среды или в улавливающую жидкость. Для этой цели используются аппарат Кротова, бактериоуловитель Речменского, прибор ПОВ-1 и др.

Для определения общего числа бактерий забирают две пробы по 100 л каждая. Посевы инкубируют в термостате 24 ч, а затем оставляют на 48 ч при комнатной температуре. Подсчитывают количество колоний на чашках, вычисляют среднее арифметическое и делают перерасчет на количество микроорганизмов в 1 м 3 воздуха.

Исследование воздуха включает определение общего числа сапрофитных бактерий, стафилококков, стрептококков, которые являются показателями биологической контаминации воздуха микрофлорой носоглотки человека.

11. На каких средах культивируют БГКП?

На среде Эндо, на простых питательных средах: мясопептонном бульоне (МПБ), мясопептонном агаре (МПА).

12. Какие объекты и предметы подлежат исследованию в помещениях аптек при санитарно-микробиологическом контроле?

Объекты бактериологических исследований в помещениях аптек при санитарно-микробиологическом контроле:

1 . Вода дистиллированная.

2 . Инъекционные растворы до стерилизации.

3 . Инъекционные растворы после стерилизации.

4 . Глазные капли после стерилизации.

5 . Глазные капли, приготовленные в асептических условиях на стерильных основах.

6 . Сухие лекарственные вещества, используемые для изготовления инъекционных растворов.

7. Аптечная посуда, пробки, прокладки, прочие вспомогательные материалы.

8. Инвентарь, оборудование, руки и санитарная одежда персонала.

9 . Воздушная среда.